Hodowla In Vitro D.m. Regular

[scurvy]

Witam wszystkich!!

Chciałbym zaprezentować moje ostatnie osiągnięcie Nasionka Dionaea muscipula "Regular form" kiełkujące sobie beztrosko na pożywkach in vitro.

Pożywki pochodzą z laboratorium. Zrobiła je dla mnie znajoma, ale sam też już takie robiłem Nasionka sterylizowałem już w mniej laboratoryjnych warunkach

(przełamałem stereotyp bo nie pracowałem pod komorą laminarną), a mimo to i tak sie udało.

 

Wszystkich, którzy mają warunki, zachęcam do prób z hodowlą in vitro, bo to świetna zabawa i dobry sposób na powiększenie swojej hodowli

 

Dziękuje Łukaszowi z Nepenti za wskazówki

 

Kilka zdjęć:

 

Edytowane 6 Września 2007 przez scurvy

[jkwiatek]

Gratulacje !

Opisz bardziej co i jak

czekam na dalsze fotki ze wzrostu roslin

[maklerw]

Fajna sprawa

Możesz powiedzieć jak zrobić taką pożywke ?? Itp. itd. jak ten proces wygląda

[Gość BartoszW]

Albo te słoiki są takie małe albo na 4 i 5 zdjęciu są takie duże siewki czkam na opisik

[BartoszTrela]

Już było kiedyś na ten temat. To jest metoda zwana hodowlą kultur tkankowych. Można naprawdę wyhodować potwora. ;D

Zdaje się, że w Nepenti korzysta się z tej metody przy hodowli muchówek i ich mutacji.

 

Wszystko w sterylnych warunkach i nie mniej skomplikowanie.

Polecam poczytać sobie artykuły z postu marrom-a.

http://nepenti.pl/forumpl/index.php?showto...ltur+tkankowych

[Gość pessos]

Witam,

Tamten temat został zamknięty (nie wiem dlaczego, no ale nie ja tu moderuję)

  marrom napisał:

Problemem są środki do dezynfekcji tkanek roślinnych oraz odpowiednie preparaty.

Polecam link do ćwiczenia wykonywanego przez studentów Wydziału Chemicznnego Politechniki Gdańskiej

Katedry Technologii Leków i Biochemii

 

..::LINK::..

 

To nie jest aż tak kosmicznie trudne do wykonania jak się wydaje

 

Pozdrawiam

Szymon

 

P.S mam nadzieje że autor tematu opisze jak on to wykonał krok po kroku

Edytowane 5 Września 2007 przez pessos

[Gość Mehi]

hehe pessos - na przykladzie tytoniu to mi sie podobalo ja mialam okazje oczyszczac mocholowki oraz rosliczki z pozostalosci po invitro czyli tej galaretki I musze stwierdzic ze rosliny sa zbite w takie pakieciki w ksztalcie kulek. ewentualne korzonki sa w srodku wiec dostanie sie do podstawy rosliny aby posadzic ja w glebie to niezla sztuka a i sam ksztalt mnie niezle zdziwil A rosliny uzyskane tym sposobem rzeczywiscie rosna szybko

[Gość pessos]

No co

Tytoń też miałem nawet trzy gatunki Hawajski, Rosyjski i Oskrzydlony Ale nie o tym mowa. Jak widać składniki nie są jakieś kosmiczne i nie do zdobycia. Zastanawia mnie tylko jedno, skoro rośliny owadożerne rosną na glebach ubogich w azot, to czy w takiej pożywce nie należałoby ograniczyć zawartości azotanów - może stąd ten ich szybki wzrost, o którym wspomniała Mehi w poście powyżej.

Odczynniki potrzebne w eksperymencie nie są kosmicznie drogie nawet w czystości cz.d.a, a w tak małych ilościach to pokusiłbym się nawet o użycie FPVI.

Pod koniec września coś pokombinuję i dam znać o moich wynikach , mam nadzieję że temat się rozwinie

Pozdrawiam

Szymon

[Gość BartoszW]

w artykule brakuje tylko jednego. Przepisu na domową pożywkę a tak poza tym to według tego przepisu wystarczy zamienić kilka składników na tak samo skuteczne i o wiele łatwiej dostępne składniki będą

[scurvy]

BartoszTrela - Zgadza się Nepenti prowadzi hodowle in vitro. Początkowo chciałem zasadzić na pożywkach tkankę roślinna (liścia, łodygę) a Lukasz poddał mi pomysł żeby zasadzić nasiona tak jak u Nich w sklepie.

 

pessos - Sterylizując nasiona korzystałem głównie z tej instrukcji do której dałeś link Co do pożywki też zastanawiałem sie z tym azotem ale wszystko śmiga jak należy pomimo związków azotowych w pożywce.

 

BartoszW - niestety przepisu na domową pożywkę nie mam Ale podam skład takiej jaką robiłem.

 

---------------------------------------------

 

Ogólnie owadożerne rośliny sadzi się na pożywce "RM" jednak w miejscu gdzie miałem praktyki dowiedziałem się że lepiej rosną na "1/2 MS".

 

Skład pożywki 1/2 MS:

 

Mikro i makro elementy (miałem wszystko w 1 mixie) 2,17 g/l

Makroelementy z pożywki RM 500 microl/l

M-inositol 100 mg/l

cukier (sacharoza) 30 g/l

glicyna 1 ml/l

FeEDTA 3 ml/l

witaminy:

1) kw. nikotynowy 0,5 mg/l

2) piroloxyna 0,5 mg/l

3) thiamina 0,1 mg/l

 

agar 7 g/l

 

końcowe pH pożywki powinno wynosić 5,5

 

---------------------------------------------

 

sterylizacje nasion przeprowadzałem tak:

 

na 24h przed zabiegiem włożyłem nasiona do GA3

 

1) moczyłem nasionka 20-30 min. w roztworze ludwika

2) przepłukałem w JAŁOWEJ wodzie

3) 5 sek. w 70% roztworze izopropanolu

4) 10 min. w 50% roztworze Ace

5) 5 min. w jałowej wodzie

6) 5 min. w jałowej wodzie

7) 25 min. w jałowej wodzie

 

---------------------------------------------

 

a na koniec ciekawostka Tak wyglądają rośliny hodowane in vitro na pożywce płynnej (bez agaru):

 

 

od lewej: D. capensis 'alba', 2x D. ramentacea i D. Anglica na agarze

[Gość pessos]

Witam,

Mam kilka pytań :

1) Napisz proszę jeszcze czym się różni 1/2 MS od MS ? Najlepiej skład 1/2 MS //edycja 1/2MS to połowa składników z pożywki MS (że też na to nie wpadłem wcześniej :: )

2) Z pożywek obecnie mi znanych to MS, B5, WPM, WH i Knop, ale nic nie słyszałem o pożywce RM opisz ją jeżeli to nie jakiś chroniony patent

Dziękujemy za już prosimy o więcej

 

A o do roślin hodowanych bez agaru to ja sie nie dziwie w końcu jak utopisz nasionko/roślinkę to ma większą powierzchnię kontaktu z pożywką ale co z dostępem tlenu - trzeba uważać ::

 

Pozdrawiam

Szymon

 

Co do postu poniżej,

Mikro i makro elementy to nie są jakieś kosmiczne związki i w małych ilościach rzędu 10g to powinni dać na jakimś uniwerku/instytucie lub szkole jak sie dobrze zagada, nie proponuje tutaj kupna z jednego zasadniczego względu - w takich małych ilościach po pierwsze trudno dostać, a po drugie jeżeli już się znajdzie firmę która zrobi naważki to wszystko wyjdzie bardzo drogo, bo to jest taki detal detalu jeżeli chodzi o sprzedaż związków chemicznych. Najwięcej trudności może być w zdobyciu witamin, które do tanich nie należą i mało kto je ma - ale prace w kierunku pozyskania witamin w dobrej cenie trwają i są zakrojone nieukrywając na skalę ogólnopolską (żeby nie powiedzieć światową) - trochę siedzę w chemii bardziej praktycznej niż zwykły student mojego kierunku to mam kilku znajomych hurtowników i dostawców więc jak na razie rozpuściłem informację że szukam tego i tego

Edytowane 7 Września 2007 przez pessos

[Matek#]

Dobra, wszystko spoko i nice, ale zasadnicze pytanie skąd to wziąść (chodzi mi o pożywkę lub prod. do pożywki)?

[Gość BartoszW]

  Matek# napisał:

Dobra, wszystko spoko i nice, ale zasadnicze pytanie skąd to wziąść (chodzi mi o pożywkę lub prod. do pożywki)?

 

Według składników pożywki jaki znalazłem na necie w porównaniu z nawozem do roślin zielonych to się wszystko zgadzało, tylko ze z tego co się orientuje pożywka ma być tak trochę gęsta

[Matek#]

Gęstości nadaje agar, ale czy na pewno wystarczy dodać do agaru tylko nawóz do roślin i trochę wody?

[Gość pessos]

Witam,

Agar posiadam w ilościach hurtowych i z tego co wiem to nie nadaje on gęstości tylko żeluje ośrodek - gęstość pozostaje niezmienna (przecież agar nie ściska pożywki ). Teoretycznie rośliny z nasion można by hodować na pożywkach in vitro, ale nie wiem jak by wyglądało ich ukorzenienie i tutaj właśnie objawia się nam rola auksyn i giberelinów oraz innych stymulatorów wzrostu, które dodane do pożywki wymuszają niejako formowanie korzeni/pędów/liści w zależności od użytego związku. Hodowla in vitro to dla mnie przede wszystkim możliwość odtworzenia całej rośliny z jej kawałka bo jeżeli ktoś posiada nasionka to równie dobrze może użyć GA3 i wysiać je do torfu i na jedno wyjdzie czyli tak czy inaczej otrzyma roślinki ::

 

Mam pytanie: ile osób byłoby zainteresowanych tak wstępnie takim rodzajem hodowli gdyby miały okazje zdobyć pożywkę ? - prosiłbym o informacje na PW

 

Pozdrawiam

Szymon